Kit de infiltración de HPMA, SPI-Chem™, soluble en agua
Instrucciones de uso
PRECAUCIÓN: Lea exhaustivamente todas las instrucciones y advertencias de las etiquetas del contenedor antes de usar este kit.
INTRODUCCIÓN
El medio de infiltración HPMA o 2-hidroxipropil metacrilato, es un monómero soluble en agua que está encontrando cada vez, un número mayor de usos tanto en el campo de la histoquímica electrónica como en de las ciencias de los materiales, donde las observaciones de revestimientos y pegamentos solubles en agua deben ser evaluadas utilizando técnicas de sección delgada. El kit de HPMA contiene los siguientes componentes:
1. Hidroxipropil metacrilato (HPMA) 2. Azo-bis-iso-butironitrilo 3. Peróxido de 2,4-diclorobenzoilo
En breve, el espécimen se deshidrata y se impregna (es infiltrado) paso a paso con HPMA prepolimerizado, conteniendo cada vez menor cantidad de agua (20'1 y 3.0%) y 0.1%, azobisisobutironitrilo o peróxido de 2,4-diclorobenzoilo como catalizador, para una polimerización posterior con luz ultravioleta (UV) o calor.
FORMULACIÓN
La preparación y mezcla del componente tipo resina hacerse minuciosamente y debe siempre llevarse a cabo en una campana de humos.
Prepolimerización del HPMA:
De acuerdo con el procedimiento de Leduc y Bernhard¹ y Leduc y Holt², se polimerizan parcialmente cantidades de hasta 30ml de HPMA que contengan 0.1% de catalizador azonitrilo, mediante calentamiento hasta alrededor de los 90°C o hasta que comience a desprender vapor, con agitación constante. Una vez que comience a desprende vapor, se enfría el matraz en un baño de hielo de tal manera que se enfríe rápidamente.
Se repite el proceso hasta que se obtenga la viscosidad deseada (la de un jarabe con un consistente flujo libre).
Deshidratación e impregnación de la muestra:
Se añade luego agua para separar líquidos del prepolímero de HPMA, preparando soluciones del 80% y del 97% de HPMA. Una impregnación típica que utiliza los prepolímeros mencionados incluye 2 cambios, de 1 hora para cada uno de los dos, el de 80% y el de 97% de HPMA.
Se utilizan alrededor de 5 ml de fluido para cada espécimen, colocados en frascos de vidrio y agitados durante la duración de la impregnación. Si se tornara turbio el HPMA debido a exceso de agua, reemplace el HPMA húmedo con un alícuota fresca antes de seguir adelante. Cada cambio de HPMA contiene 0.1% de azonitrilo para asegurar la impregnación completa de las muestras con el catalizador.
La infiltración y la polimerización
Se colocan en seguida las muestras en prepolímero fresco de 97% en cápsulas de gelatina. Para obtener un polímero final más suave y menos quebradizo, se puede utilizar hasta el 10% de agua durante: la polimerización final (esto es, 90% de HPMA prepolimerizado) Las cápsulas deben ser llenadas a capacidad, para asegurar la exclusión de aire cuando las tapas sean presionadas hacia abajo para un cierre justo.
La polimerización puede lograrse mediante la exposición de las cápsulas a luz UV de larga longitud de onda (3150A), en frío (1-3°C) durante 12 a 24 hrs. En forma alterna, para polimerización con calor, se pueden mantener las cápsulas a 56-60°C durante 2 a 3 días.
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1) Leduc, E.H. y Bernard, W.V, J. Ultrastruct. RES. 19, 196 (1967)
2) Leduc, E.H. y Holt, S.J., J. Cel Biol. 26, 137 (1965)
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Wednesday March 17, 2010
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